高效液相色谱仪是药品检验的主要分析仪器。其核心部件液相色谱柱是一种消耗材料，对它的维护和保养关系到测量的准确性，因此对高效液相色谱柱的维护保养至关重要。本文主要就高效液相色谱柱的活化、维护与保养提出了在使用中注意事项及分析试验过程中与色谱柱相关的故障排除。

　　一、色谱柱结构、分类

　　结构：液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板、柱接头、滤片及柱填料组装而成。

　　柱填料：正相柱多以硅胶为填料；反相柱主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团（ODS)的非极性填料。

　　分类：C18、C8、苯基、氰基、氨基、硅胶、苯乙基、五氟苯基、离子交换色谱柱。

　　一、新色谱柱的活化

　　新色谱柱都是保存在一定的保存液中所谓活化就是替换掉其中的保存液，冲洗掉柱中可能残留的其它杂质。

　　①使用新的C18色谱柱时，用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，然后用甲醇/乙腈:水(50:50)冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡10-30柱体积。

　　②使用新的正相色谱柱时，用流动相平衡20-30个柱体积。

　　③Thermo部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流动相中，用于反相色谱时，先用异丙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积。

　　④离子色谱柱，新柱先用100%甲醇/或乙腈冲洗20个柱体积，然后转换到流动相平衡。

　　三、色谱柱使用过程中注意事项及日常维护保养

　　①使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相离子性流动相中有一定的溶解度)。

　　②大多数反相色谱柱的pH适用范围是2.0-8.0，BDS C18适用于碱性化合物，pH适用范围是2.0-10.0。

　　③避免流动相组成及极性的剧烈变化。

　　④使用HPLC级试剂，流动相使用前必须经脱气和过滤处理。

　　⑤如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净，并保存在乙腈中。

　　⑥压力升高是需要更换预柱的信号。

　　⑦在使用前，一定要注意色柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。

　　⑧避免压力的突变。

　　⑨在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。

　　⑩色谱柱每次使用完毕后建议用梯度清洗，依次用10%甲醇/乙腈冲洗10-20个柱体积，再用40%甲醇/乙腈冲洗10-20个柱体积，最后用80%甲醇/乙腈冲洗10-20个柱体积。

　　四、色谱柱日常保存及再生

　　1、保存

　　切忌用缓冲盐保存色谱柱（氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀）。

　　反相柱：100%甲醇或乙腈。

　　正相柱：异丙醇或正己烷。

　　离子交换柱：100%甲醇、大于40%的有机相或储存于水中（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）。

　　2、再生

　　反相色谱柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90，乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反方向冲洗色谱柱

　　正相色谱柱的再生：依次以20-30倍的色谱柱体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷，四氢呋喃作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反方向冲洗色谱柱，要注意上述溶剂必须严格脱水。

　　五、色谱常见故障排除-与色谱柱相关

　　参考文献：

　　1、陆森林，张虎军.高效液相色谱仪色谱柱维护与保养.

　　2、Zhonghui.液相色谱柱使用注意事项及再生HPLC故障及处理

　　3、Thermo Fisher Scientific,金琦芸.色谱柱活化和保养

　　4、液相色谱柱的使用注意事项及再生.科学仪器在线