实验室使用的测试仪器很多，其中高效液相色谱(HPLC)就是其中之一。该仪器是在经典色谱的基础上，引用气相色谱理论，从技术上将流动相改为高压输送的。以下部分将介绍高效液相色谱(HPLC)的原理和应用、特点、故障原因和处理方法。
高效液相色谱法的工作原理及应用
流动相通过高压泵进入系统，样品溶液通过注射器进入流动相，流动相加载到色谱柱(固定相)中。由于样品溶液中各组分在两相中的分配系数不同，经过两相反复吸附-解吸分配后，各组分的运动速度有很大的不同。它被分离成一个单独的组件，然后依次从列中流出。当样品浓度通过检测器时，样品浓度被转换成电信号并传送给记录器，数据以地图的形式打印出来。
1.在环境分析中的应用：可用于环芳烃(PAHs)、农药残留分析等。
二、在食品分析中的应用：可用于食品营养分析、食品添加剂分析、食品污染物分析等。
3.在生命科学中的应用：生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学和生物化学中分子量物质的纯化、分离和测定可以从分子水平上进行研究。
4.在医学检查中的应用：体液中代谢物的分析和测定、药动学、临床药物监测等。
5.无机分析中的应用：阴离子和阳离子的分析等。
高效液相色谱常见故障处理
故障1：在移动相存在气泡，关闭泵，打开排气阀，按下清洗键和通风口，气泡继续从过滤器中冒出来，进入移动相，无论打开多少次清洗键，都不能清除连续产生的气泡。
理由：
过滤器在水中浸泡很长时间，由于霉菌在过滤头中的生长和传播，过滤器被细菌的形成所堵塞。"缓冲器很难顺利通过过滤头，空气在泵的压力下通过过滤器进入移动相。过滤头用5%硝酸溶液浸泡，超声清洗15 min。滤头还可以在5%硝酸溶液中浸泡12小时，轻轻震荡36小时，然后用纯净水冲洗几次，打开排气阀，打开净化键，从滤池中取出气体，如果过滤器中还有气泡，则继续将过滤器浸泡在5%硝酸溶液中。如果过滤器内没有气泡继续出现，就意味着过滤器内的霉菌可以被硝酸破坏，流动相可以顺利通过过滤器，打开排气阀，打开泵流量调节1。0×30 mL/min，冲洗1小时左右，即可清洗滤液。关闭减压阀，用纯甲醇冲洗半小时。
故障2：柱压高；
原因：
(1)缓冲液盐份如，乙酸铵等，沉积柱内；
(2)样品污染沉积：
处理对于第一种情况先用40～50度的纯水，低速正向冲洗柱子待柱压逐渐下降后，相应的提高流速冲洗柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟，对于第2种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇[4+6]冲洗柱子[冲洗时间的长短由样品的污染情况而定]，在用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗，正向冲洗柱子30分钟以上。
故障3：既无压力指示又无液体流过
原因：
1.泵密封垫圈磨损；
2.大量气体进入泵体：
处理对于第一种情况,更换密封垫圈，对于第二种情况,在泵作用的同时，用一个50mL的玻璃针筒在泵的出口处不帮助抽出空气。
故障4：压力波动很大，流量不稳定。
理由：
宝石球与空气座或单向阀之间有异物，使两者不能密封；
处理：注意工作中流动相的量，确保不锈钢过滤器沉入贮液瓶底部，避免吸入空气，移动相应完全放气，例如单向阀与阀座之间有异物，拆下单向阀，放入装有丙酮的烧杯中，用超声波清洗。
故障5：峰不准确，峰叉。
高效率3.jpg
理由：
(1)色谱柱受到污染；
(2)封头包装倒塌：
对于第一种情况，先用纯水向后冲洗柱，然后用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，然后用甲醇冲洗，然后用纯净水冲洗，最后用前冲30分钟以上。如果冲洗后的峰值仍不佳，则考虑第二种情况。在第二种情况下，松开封头，检查柱填料是否硬化或坍塌，拆卸硬化部分(污染的填料)，装入新填料，滴下一滴甲醇，填料沉入，再填充，用与辅助内径相同的光滑不锈钢棒压下，填充、滴下甲醇，并反复按压几次直到填充。用甲醇冲洗头部，擦拭柱外壁的填料，拧紧头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
故障6：峰面积重复性差。
理由：
(1)注射阀泄漏夜；
(2)样本针未到位：
处理：
对于第一种情况，应更换注射垫圈；对于第二种情况，应将注射针插入末端，样品溶液应从负载状态迅速平稳地转移到注入状态，以确保注射量的准确性。在日常生活中，液相色谱仪的维护是非常重要的，如注意不让空气进入输液系统和高压泵，如不使用时间，应清洗和更换液体储罐中的溶液，每次使用色谱仪后，应用纯净水冲洗缓冲液，以防止无机盐的沉淀或沉淀。样品预处理也是非常重要的，任何样品都应尽可能去除杂质，完全溶解，尽可能减少色谱柱的污染，以延长色谱的使用寿命，同时避免注入过量的样品溶液，从而避免在注入阀中残留的液体沉淀造成堵塞；色谱标记、色谱用于不同分析目的色谱不应混合等。
以上知识是我们共同了解的高效液相色谱(HPLC)的原理、应用、特点、故障原因和处理方法。我希望你能从中得到一些东西。在使用高性能液相色谱仪的过程中会出现许多问题。如果操作人员能够了解故障的原因，就可以预防和消除这些故障，并为正确使用该仪器发挥最大的性能。
